Teoriyên parastina nebatan rêbernameyek teorîk a girîng ji bo ravekirina şêwazên metabolîzma taybetî ya nebatan peyda dikin, lê pêşbîniyên wan ên sereke hîn jî nayên ceribandin. Li vir, me analîza spektrometriya girseyî ya tandem a bêalî (MS/MS) bikar anî da ku bi awayekî sîstematîk metaboloma celebên qelskirî yên titûnê ji nebatan ferdî ber bi nifûsan û cureyên nêzîk ve lêkolîn bikin, û hejmareke mezin ji teoriyên taybetmendiyên spektrometriya girseyî li ser bingeha spektrên tevlihev di agahdariyê de pêvajo kirin. Çarçove ji bo ceribandina pêşbîniyên sereke yên teoriyên parastina çêtirîn (OD) û hedefa tevger (MT). Pêkhateya agahdariyê ya metabolomîka nebatan bi teoriya OD re lihevhatî ye, lê pêşbîniya sereke ya teoriya MT li ser dînamîkên metabolomîk ên ji hêla gihaxwaran ve têne çêkirin nakok dike. Ji pîvana mîkro heta makro ya pêşveçûnê, sînyala jasmonate wekî diyarkerê sereke yê OD hate nas kirin, di heman demê de sînyala etîlenê mîhengkirina baş a bersiva taybetî ya gihaxwaran peyda kir ku ji hêla tora molekulî ya MS/MS ve hatî şîrove kirin.
Metabolîtên taybet ên bi avahiyên cihêreng beşdarên sereke ne di adaptasyona nebatan de bi jîngehê re, nemaze di parastina dijminan de (1). Cûrbecûrbûna ecêb a metabolîzma taybet a ku di nebatan de tê dîtin, dehsalan lêkolînên kûr li ser gelek aliyên fonksiyonên ekolojîk teşwîq kiriye, û navnîşek dirêj ji teoriyên parastina nebatan pêk aniye, ku pêşkeftina evolusyonî û ekolojîk a têkiliyên nebat-kêzikan in. Lêkolîna empîrîk rêbernameyek girîng peyda dike (2). Lêbelê, van teoriyên parastina nebatan rêya normativ a aqilê deduktîf ê hîpotetîk neşopandine, ku tê de pêşbîniyên sereke di heman asta analîzê de bûn (3) û bi ceribandinî hatin ceribandin da ku çerxa pêş a pêşkeftina teorîk pêşve bibin (4). Sînorkirinên teknîkî berhevkirina daneyan bi kategoriyên metabolîk ên taybetî ve sînordar dikin û analîza berfireh a metabolîtên pispor derdixin, bi vî rengî rê li ber berhevdanên nav-kategorî digirin ku ji bo pêşkeftina teorîk girîng in (5). Nebûna daneyên metabolomîk ên berfireh û pereyek hevpar ji bo berhevdana herikîna karê pêvajoyê ya qada metabolîk di navbera komên nebatan ên cûda de astengî li gihîştina zanistî ya qadê dike.
Pêşketinên herî dawî di warê metabolomîka spektrometriya girseyî ya tandem (MS/MS) de dikarin bi berfirehî guhertinên metabolîk di nav û di navbera cureyên komek pergalên diyarkirî de nîşan bidin, û dikarin bi rêbazên hesabkirinê re werin hev kirin da ku wekheviya avahîsaziyê di navbera van tevliheviyên tevlihev de were hesibandin. Zanîna berê ya kîmyayê (5). Têkeliya teknolojiyên pêşkeftî di analîz û hesabkirinê de çarçoveyek pêwîst ji bo ceribandina demdirêj a gelek pêşbîniyên ku ji hêla teoriyên ekolojîk û evolusyonî yên cihêrengiya metabolîk ve têne çêkirin peyda dike. Shannon (6) di gotara xwe ya bingehîn a sala 1948-an de cara yekem teoriya agahdariyê da nasîn, bingeha analîza matematîkî ya agahdariyê danî, ku di gelek warên din de ji bilî sepandina wê ya orîjînal hatiye bikar anîn. Di genomîkê de, teoriya agahdariyê bi serkeftî ji bo pîvandina agahdariya parastî ya rêzê hatiye sepandin (7). Di lêkolîna transkrîptomîkê de, teoriya agahdariyê guhertinên giştî yên di transkrîptomê de analîz dike (8). Di lêkolînên berê de, me çarçoveya îstatîstîkî ya teoriya agahdariyê li metabolomîkê sepand da ku pisporiya metabolîk a asta tevnê di nebatan de diyar bike (9). Li vir, em herikîna xebatê ya li ser bingeha MS/MS bi çarçoveya îstatîstîkî ya teoriya agahdariyê re, ku bi cihêrengiya metabolîk di pereyê hevpar de tê xuyang kirin, dikin yek da ku pêşbîniyên sereke yên teoriya parastina nebatan a metaboloma ku ji hêla gihaxwaran ve tê çêkirin bidin ber hev.
Çarçoveyên teorîk ên parastina nebatan bi gelemperî hevûdu dihewînin û dikarin li du kategoriyan werin dabeş kirin: yên ku hewl didin belavbûna metabolîtên taybetî yên nebatan li gorî fonksiyonên parastinê rave bikin, wekî parastina çêtirîn (OD) (10), hedefa tevger (MT) (11) û teoriya xuyabûnê (12), hinên din li ravekirinên mekanîkî digerin ka guhertinên di berdestbûna çavkaniyan de çawa bandorê li mezinbûna nebatan û kombûna metabolîtên taybetî dikin, wekî karbon: hîpoteza hevsengiya xurekê (13), hîpoteza rêjeya mezinbûnê (14), û hîpoteza hevsengiya mezinbûn û cûdakirinê (15). Her du komên teoriyan di astên cûda yên analîzê de ne (4). Lêbelê, du teoriyên ku fonksiyonên parastinê di asta fonksiyonel de vedihewînin serdestiya axaftina li ser parastinên damezrîner û teşwîqker ên nebatan dikin: teoriya OD, ku texmîn dike ku nebat tenê dema ku hewce be, wek mînak, dema ku ew têne xwarin, di parastinên xwe yên kîmyewî yên biha de veberhênan dikin. Dema ku heywanek giya êrîş dike, ji ber vê yekê, li gorî îhtîmala êrîşa pêşerojê, pêkhateya bi fonksiyonek parastinê tê destnîşankirin (10); Hîpoteza MT pêşniyar dike ku eksena guhertina metabolîta arasteyî tune ye, lê metabolît bi awayekî rasthatî diguhere, bi vî rengî îhtîmala "armanca tevgera" metabolîk a êrîşa gihaxwaran asteng dike. Bi gotineke din, ev her du teorî pêşbîniyên berevajî li ser ji nû ve çêkirina metabolîk a ku piştî êrîşa gihaxwaran çêdibe dikin: têkiliya di navbera kombûna yekalî ya metabolîtên bi fonksiyona parastinê (OD) û guhertinên metabolîk ên ne-arastekirî (MT) (11).
Hîpoteza OD û MT ne tenê guhertinên çêkirî yên di metabolomê de, lê di heman demê de encamên ekolojîk û evolusyonî yên kombûna van metabolîtan jî vedihewîne, wekî lêçûn û feydeyên adapteyî yên van guhertinên metabolîk di hawîrdorek ekolojîk a taybetî de (16). Her çend her du hîpotez fonksiyona parastinê ya metabolîtên taybetî nas dikin, ku dibe ku biha bin an nebin, pêşbîniya sereke ku hîpoteza OD û MT ji hev vediqetîne di rêça guhertinên metabolîk ên çêkirî de ye. Pêşbîniya teoriya OD heta niha bala herî zêde ya ceribandinî kişandiye. Ev ceribandin lêkolîna fonksiyonên parastinê yên rasterast an nerasterast ên tevnên cûda yên pêkhateyên taybetî di serayan û şert û mercên xwezayî de, û her weha guhertinên di qonaxa pêşkeftina nebatan de vedihewîne (17-19). Lêbelê, heya niha, ji ber nebûna çarçoveyek xebatê û statîstîkî ji bo analîza berfireh a gerdûnî ya cihêrengiya metabolîk a her organîzmayek, pêşbîniya cûdahiya sereke di navbera her du teoriyan de (ango, rêça guhertinên metabolîk) hîn jî divê were ceribandin. Li vir, em analîzek wusa pêşkêş dikin.
Yek ji taybetmendiyên herî girîng ên metabolîtên taybetî yên nebatan, cihêrengiya wan a avahîsaziyê ya zêde di hemî astan de, ji nebatan, nifûsan bigire heya cureyên wekhev e (20). Gelek guhertinên hejmarî di metabolîtên pispor de dikarin di asta nifûsê de werin dîtin, lê cûdahiyên kalîtîf ên bihêz bi gelemperî di asta cureyan de têne parastin (20). Ji ber vê yekê, cihêrengiya metabolîk a nebatan aliyê sereke yê cihêrengiya fonksiyonel e, ku adapteyîbûna bi nîşên cûda re nîşan dide, nemaze ew nîşên ku îhtîmalên dagirkirinê yên cûda ji hêla kêzikên taybetî û gihaxwarên hevpar ve hene (21). Ji gotara şoreşger a Fraenkel (22) ve li ser sedemên hebûna metabolîtên taybetî yên nebatan, têkiliyên bi kêzikên cûda re wekî zextên hilbijartinê yên girîng hatine hesibandin, û tê bawerkirin ku van têkiliyan di dema pêşveçûnê de nebatan şekil dane. Rêya metabolîk (23). Cûdahiyên di navbera cureyan de di cihêrengiya metabolîtên pispor de dibe ku hevsengiya fîzyolojîkî ya ku bi parastina nebatan a damezrîner û teşwîqker ve girêdayî ye li dijî stratejiyên gihaxwar jî nîşan bidin, ji ber ku her du cure pir caran bi hevûdu re bi rengek neyînî ve girêdayî ne (24). Her çend dibe ku her dem parastineke baş sûdmend be jî, guhertinên metabolîk ên di wextê xwe de yên bi parastinê ve girêdayî feydeyên zelal peyda dikin di rêdana nebatan de ku çavkaniyên hêja ji bo veberhênanên din ên fîzyolojîk veqetînin (19, 24), û hewcedariya sembiyozê dûr bixin. Zirara alîgir (25). Wekî din, ev ji nû ve organîzekirina metabolîtên taybetî yên ji hêla kêzikên gihaxwar ve têne çêkirin dibe ku bibe sedema belavkirina wêranker di nifûsê de (26), û dibe ku xwendinên rasterast ên guhertinên xwezayî yên girîng di sînyala asîda jasmonîk (JA) de nîşan bidin, ku dibe ku di nifûsê de were parastin. Sînyalên JA yên bilind û nizm danûstandinên di navbera parastinê li dijî gihaxwaran û pêşbaziyê bi cureyên taybetî re ne (27). Wekî din, rêyên bîyosentezê yên metabolîtên taybetî dê di dema pêşveçûnê de windabûn û veguherînek bilez derbas bikin, ku dibe sedema belavkirina metabolîk a nelihev di navbera cureyên nêzîk de (28). Ev polîmorfîzm dikarin bi lez di bersiva guherîna şêwazên gihaxwaran de werin saz kirin (29), ku tê vê wateyê ku guherîna civakên gihaxwar faktorek sereke ye ku heterojenîteya metabolîk dimeşîne.
Li vir, me bi taybetî pirsgirêkên jêrîn çareser kirin. (I) Kêzika gihaxwar çawa metaboloma nebatan ji nû ve saz dike? (Ii) Pêkhateyên sereke yên agahdariya plastîkbûna metabolîk çi ne ku dikarin werin hejmartin da ku pêşbîniyên teoriya parastina demdirêj werin ceribandin? (Iii) Ma metaboloma nebatan bi awayekî taybetî ji bo êrîşkar ji nû ve were bernamekirin, heke wusa be, hormona nebatan di çêkirina bersivek metabolîk a taybetî de çi rol dilîze, û kîjan metabolîtan beşdarî taybetmendiya cureyê parastinê dibin? (Iv) Ji ber ku pêşbîniyên ku ji hêla gelek teoriyên parastinê ve têne çêkirin dikarin li seranserê hemî astên tevnên biyolojîkî werin dirêj kirin, me pirsî ka bersiva metabolîk a ku çêdibe çiqas ji berhevdana navxweyî heya berhevdana navbera cureyan domdar e? Ji bo vê armancê, me bi awayekî sîstematîk metaboloma pelên nîkotîna titûnê lêkolîn kir, ku nebatek modelek ekolojîk e ku metabolîzma wê ya pispor dewlemend e, û li dijî larvayên du gihaxwarên xwecihî, Lepidoptera Datura (Ms) (Pir êrîşkar, bi piranî tê xwarin) bi bandor e. Li ser Solanaceae û Spodoptera littoralis (Sl), kurmikên pelên pembû cureyek "cins" in, digel nebatên mêvandar ên Solanaceae û mêvandarên din ên cins û malbatên din ên xwarina nebatan. Me spektruma metabolomîk a MS/MS analîz kir û danasînên îstatîstîkî yên teoriya agahdariyê derxistin da ku teoriyên OD û MT bidin ber hev. Nexşeyên taybetmendiyê biafirînin da ku nasnameya metabolîtên sereke eşkere bikin. Analîz ji bo nifûsa xwecihî ya N. nasi û cureyên titûnê yên nêzîk hate berfireh kirin da ku hevguherîna di navbera sînyala hormona nebatan û înduksiyona OD de bêtir were analîz kirin.
Ji bo ku nexşeyek giştî li ser plastîkbûn û avahiya metaboloma pelê titûna gihaxwar were girtin, me xebateke analîz û hesabkirinê ya berê hatî pêşxistin bikar anî da ku bi berfirehî spektrumên MS/MS yên serbixwe yên daneyên çareseriya bilind ji ekstraktên nebatan (9) berhev bikin û veqetînin. Ev rêbaza ne cuda (ku jê re MS/MS tê gotin) dikare spektrumên pêkhateyên ne-zêde ava bike, ku dûv re dikarin ji bo hemî analîzên asta pêkhateyan ên ku li vir hatine vegotin werin bikar anîn. Ev metabolîtên nebatan ên veqetandî ji celebên cûda ne, ji sedan heta bi hezaran metabolîtan pêk tên (li vir nêzîkî 500-1000-s/MS/MS). Li vir, em plastîkbûna metabolîk di çarçoveya teoriya agahdariyê de dinirxînin, û cûrbecûr û profesyonelîzma metaboloma li gorî entropiya Shannon a belavkirina frekansa metabolîk dipîvin. Bi karanîna formula berê hatî bicîh kirin (8), me komek nîşanekan hesab kir ku dikarin ji bo veqetandina cûrbecûrbûna metaboloma (nîşaneya Hj), pisporbûna profîla metabolîk (nîşaneya δj) û taybetmendiya metabolîk a metabolîtek yekane (nîşaneya Si) werin bikar anîn. Herwiha, me Îndeksa Plastîsîteya Dûrbûna Nisbî (RDPI) bikar anî da ku em îhtîmala metabolomê ya gihaxwaran bipîvin (Wêne 1A) (30). Di vê çarçoveya îstatîstîkî de, em spektruma MS/MS wekî yekîneya agahdariya bingehîn bihesibînin, û pirbûna nisbî ya MS/MS di nexşeyek belavkirina frekansê de pêvajo bikin, û dûv re entropiya Shannon bikar bînin da ku cûrbecûrbûna metabolomê ji wê texmîn bikin. Pisporbûna metabolomê bi taybetmendiya navînî ya yek spektruma MS/MS tê pîvandin. Ji ber vê yekê, zêdebûna pirbûna hin çînên MS/MS piştî îhtîmala gihaxwaran vediguhere îhtîmalbûna spektral, RDPI û pisporbûnê, ango zêdebûna îndeksa δj, ji ber ku metabolîtên pisportir têne hilberandin û îndeksek Si ya bilind tê hilberandin. Kêmkirina îndeksa cihêrengiya Hj nîşan dide ku an hejmara MS/MS-yên çêkirî kêm dibe, an jî belavkirina frekansa profîlê di rêgezek kêmtir yekreng de diguhere, di heman demê de nezelaliya wê ya giştî kêm dike. Bi rêya hesabkirina endeksa Si, mimkun e ku were destnîşankirin ka kîjan MS/MS ji hêla hin gihaxwaran ve têne teşwîqkirin, berevajî vê, kîjan MS/MS bersiva teşwîqkirinê nade, ku ev nîşaneyek sereke ye ji bo cûdakirina pêşbîniya MT û OD.
(A) Danasînên îstatîstîkî yên ku ji bo teşwîqkirina daneyên MS/MS (RDPI), cihêrengiyê (îndeksa Hj), pisporiyê (îndeksa δj) û taybetmendiya metabolîtan (îndeksa Si) yên gihaxwar (ji H1 heta Hx) têne bikar anîn. Zêdebûna pileya pisporiyê (δj) nîşan dide ku, bi navînî, metabolîtên taybetî yên gihaxwar bêtir dê werin hilberandin, lê kêmbûna cihêrengiyê (Hj) kêmbûna hilberîna metabolîtan an belavbûna neyeksan a metabolîtan di nexşeya belavkirinê de nîşan dide. Nirxa Si dinirxîne ka metabolît ji bo rewşek diyarkirî taybetî ye (li vir, gihaxwar) an berevajî vê di heman astê de tê parastin. (B) Diyagrama têgehî ya pêşbîniya teoriya parastinê bi karanîna eksena teoriya agahdariyê. Teoriya OD pêşbînî dike ku êrîşa gihaxwar dê metabolîtên parastinê zêde bike, bi vî rengî δj zêde bike. Di heman demê de, Hj kêm dibe ji ber ku profîl ber bi kêmbûna nezelaliya agahdariya metabolîk ve ji nû ve tê organîzekirin. Teoriya MT pêşbînî dike ku êrîşa gihaxwar dê bibe sedema guhertinên ne-alî di metabolomê de, bi vî rengî Hj wekî nîşaneyek zêdebûna nezelaliya agahdariya metabolîk zêde dike û dibe sedema belavkirinek bêserûber a Si. Me modelek tevlihev jî pêşniyar kir, MT-ya çêtirîn, ku tê de hin metabolîtên bi nirxên parastinê yên bilindtir dê bi taybetî zêde bibin (nirxa Si bilind), hinên din jî bersivên rasthatî nîşan didin (nirxa Si nizmtir).
Bi karanîna danasînên teoriya agahdariyê, em teoriya OD şîrove dikin da ku pêşbînî bikin ku guhertinên metabolîtên taybetî yên ji hêla gihaxwaran ve di rewşek damezrîner a neçalakkirî de dê bibin sedema (i) zêdebûna taybetmendiya metabolîk (îndeksa Si) ku taybetmendiya metabolomîk (îndeksa δj) diajo. Zêdebûna) hin komên metabolîtên taybetî yên bi nirxa parastinê ya bilindtir, û (ii) kêmbûna cihêrengiya metabolomê (îndeksa Hj) ji ber guherîna belavkirina frekansa metabolîk bo belavkirina laşê leptîn a bêtir. Di asta metabolîtek yekane de, belavkirinek Si ya rêzkirî tê hêvî kirin, ku metabolît dê nirxa Si li gorî nirxa parastina xwe zêde bike (Wêne 1B). Li ser vê xetê, em teoriya MT rave dikin da ku pêşbînî bikin ku teşwîqkirin dê bibe sedema (i) guhertinên ne-alî di metabolîtan de ku dibin sedema kêmbûna îndeksa δj, û (ii) zêdebûna îndeksa Hj ji ber zêdebûna nezelaliya metabolîk. An jî bêserûberî, ku dikare bi entropiya Shannon di forma cihêrengiya gelemperî de were hejmartin. Di derbarê pêkhateya metabolîk de, teoriya MT dê belavkirina bêserûber a Si pêşbînî bike. Bi berçavgirtina ku hin metabolîtên di bin şert û mercên taybetî de ne, û şert û mercên din ne di bin şert û mercên taybetî de ne, û nirxa parastina wan bi jîngehê ve girêdayî ye, me modelek parastinê ya tevlihev jî pêşniyar kir, ku tê de δj û Hj li ser Si di du aliyan de belav dibin. Di hemî aliyan de zêde dibe, tenê hin komên metabolîtan, ku nirxên parastinê yên wan bilindtir in, dê bi taybetî Si zêde bikin, hinên din dê belavbûnek rasthatî hebe (Wêne 1B).
Ji bo ceribandina pêşbîniya teoriya parastinê ya ji nû ve hatî pênasekirin li ser eksena danasîna teoriya agahdariyê, me larvayên gihaxwar ên pispor (Ms) an giştî (Sl) li ser pelên Nepenthes pallens raber kirin (Wêne 2A). Bi karanîna analîza MS/MS, me 599 spektrumên MS/MS yên ne-zêde (pelê daneyê S1) ji ekstraktên metanolê yên tevna pelê yên piştî xwarina kêzikan berhevkirî derxistin. Bi karanîna endeksên RDPI, Hj, û δj ji bo dîtina ji nû ve mîhengkirina naveroka agahdariyê di pelên mîhengê MS/MS de qalibên balkêş eşkere dike (Wêne 2B). Trenda giştî ev e ku, wekî ku ji hêla danasîna agahdariyê ve hatî vegotin, her ku kêzik berdewam dikin ku pelan bixwin, asta hemî ji nû ve rêxistinkirina metabolîk bi demê re zêde dibe: 72 demjimêran piştî ku gihaxwar dixwe, RDPI bi girîngî zêde dibe. Li gorî kontrola nezirardar, Hj bi girîngî kêm bû, ku ji ber asta pisporbûna zêde ya profîla metabolîk bû, ku bi endeksa δj ve hate hejmartin. Ev meyla eşkere lihevhatî ye bi pêşbîniyên teoriya OD re, lê ne lihevhatî ye bi pêşbîniyên sereke yên teoriya MT re, ku bawer dike ku guhertinên rasthatî (ne-alî) di asta metabolîtan de wekî kamuflajek parastinê têne bikar anîn (Wêne 1B). Her çend naveroka derxistina devkî (OS) û tevgera xwarinê ya van her du gihaxwaran ji hev cûda bin jî, xwarina wan a rasterast di heyamên berhevkirina 24 demjimêr û 72 demjimêran de di rêwerzên Hj û δj de bû sedema guhertinên wekhev. Tenê cûdahî di 72 demjimêrên RDPI de çêbû. Li gorî ya ku ji hêla xwarina Ms ve hatî çêkirin, metabolîzma giştî ya ku ji hêla xwarina Sl ve hatî çêkirin bilindtir bû.
(A) Sêwirana ceribandinê: gihaxwerên berazê asayî (S1) an pispor (Ms) bi pelên bêxwê yên nebatan têne xwarin, lê ji bo gihaxweriya simulasyonkirî, OS ya Ms (W + OSMs) ji bo birêvebirina qulkirina pozîsyonên pelên standardkirî tê bikar anîn. S1 (W + OSSl) larva an av (W + W). Kontrol (C) pelek bê zirar e. (B) Îndeksa Teşwîqkirinê (RDPI li gorî nexşeya kontrolê), cûrbecûr (îndeksa Hj) û pisporbûnê (îndeksa δj) ji bo nexşeya metabolîta taybetî (599 MS/MS; pelê daneyê S1) hatî hesibandin. Stêrk cûdahiyên girîng di navbera xwarina rasterast a gihaxwer û koma kontrolê de nîşan didin (Test-a Xwendekar bi testa t-ya cotkirî, *P<0.05 û ***P<0.001). ns, ne girîng e. (C) Îndeksa çareseriya demê ya sereke (qutiya şîn, asîda amînî, asîda organîk û şekir; pelê daneyê S2) û spektruma metabolîtên taybet (qutiya sor 443 MS/MS; pelê daneyê S1) piştî dermankirina gihaxwar a simulasyonkirî. Benda rengîn behsa navbera baweriya 95% dike. Stêrk cûdahiya girîng di navbera dermankirinê û kontrolê de nîşan dide [analîza çargoşeyî ya guherînê (ANOVA), dûv re cûdahiya girîng a Tukey (HSD) ji bo berawirdkirinên pirjimar ên piştî hoc, *P<0.05, **P<0.01 Û *** P <0.001]. (D) Pisporiya nexşeyên belavbûnê û profîlên metabolîtên taybet (nimûneyên dubarekirî bi dermankirinên cûda).
Ji bo lêkolîna ka gelo ji nû ve çêkirina gihaxwaran di asta metabolomê de di guhertinên di asta metabolîtên takekesî de tê xuyang kirin, me pêşî li ser metabolîtên ku berê di pelên Nepenthes pallens de bi berxwedana gihaxwaran a îsbatkirî hatine lêkolîn kirin, sekinîn. Amîdên fenolîk konjugatên hîdroksînnamamîd-polîyamîn in ku di dema pêvajoya gihaxwaran a kêzikan de kom dibin û tê zanîn ku performansa kêzikan kêm dikin (32). Me li pêşberên MS/MS-ya têkildar geriya û xêzên wan ên kînetîk ên berhevkirî xêz kirin (Wêneya S1). Ne ecêb e ku derivatîfên fenolê yên ku rasterast di parastina li dijî gihaxwaran de beşdar nabin, wekî asîda klorogenîk (CGA) û rûtîn, piştî gihaxwaran kêm dibin. Berevajî vê, gihaxwar dikarin amîdên fenolê pir bi hêz bikin. Xwarina domdar a her du gihaxwaran bû sedema hema hema heman spektruma tehrîkkirinê ya fenolamîdan, û ev şêwaz bi taybetî ji bo senteza de novo ya fenolamîdan eşkere bû. Dema ku rêça glîkozîdên dîterpen ên 17-hîdroksîgeranîl nonanedîol (17-HGL-DTG) tê lêkolînkirin, heman diyarde dê were dîtin, ku hejmareke mezin ji dîterpenên asîklîkî yên bi fonksiyonên dij-gihaxwar ên bi bandor çêdike (33), ku ji wan Ms Feeding bi Sl profîlek îfadeyê ya wekhev çêkir (Wêne S1).
Dezawantaja muhtemel a ceribandinên xwarina rasterast a gihaxwaran cudahiya di rêjeya vexwarina pelan û dema xwarinê ya gihaxwaran de ye, ku ji holê rakirina bandorên taybetî yên gihaxwaran ên ji ber birîn û gihaxwaran çêdibin dijwar dike. Ji bo ku em taybetmendiya cureyên gihaxwaran a bersiva metabolîk a pelê ya teşwîqkirî çêtir çareser bikin, me xwarina larvayên Ms û Sl bi sepandina tavilê ya OS-ya nû berhevkirî (OSM û OSS1) li qulika standard W ya pozîsyonên pelê yên domdar simulasyon kir. Ev prosedur wekî dermankirina W + OS tê binavkirin, û ew teşwîqkirinê bi demjimêrkirina rast a destpêka bersiva ku ji hêla gihaxwaran ve hatî çêkirin bêyî ku bandorên tevlihev ên cûdahiyên di rêjeyê an mîqdara windabûna tevnê de çêbike standard dike (Wêne 2A) (34). Bi karanîna analîz û xeta hesabkirina MS/MS, me 443 spektrumên MS/MS (pelê daneyan S1) bi dest xistin, ku bi spektrumên ku berê ji ceribandinên xwarina rasterast hatine berhev kirin re li hev diketin. Analîza teoriya agahdariyê ya vê koma daneyên MS/MS nîşan da ku ji nû ve bernamekirina metabolomên taybetî yên pelan bi simulasyona gihaxwaran teşwîqên taybetî yên OS nîşan da (Wêne 2C). Bi taybetî, li gorî dermankirina OSS1, OSM di 4 demjimêran de bû sedema zêdebûnek di pisporiya metabolomê de. Hêjayî gotinê ye ku li gorî daneyên ceribandinê yên xwarina rasterast a gihaxwaran, kînetîka metabolîk di qada du-alî de bi karanîna Hj û δj wekî koordînat û rêweriya pisporiya metabolomê di bersiva dermankirina gihaxwaran a simulasyonkirî de bi demê re hate xuyang kirin, Zêdebûn domdar e (Wêne 2D). Di heman demê de, me naveroka asîdên amînî, asîdên organîk û şekiran (pelê daneyê S2) hejmar kir da ku lêkolîn bikin ka ev zêdebûna armanckirî di pisporiya metabolomê de ji ber ji nû ve mîhengkirina metabolîzma karbonê ya navendî di bersiva gihaxwaran a simulasyonkirî de ye (Wêne S2). Ji bo ku em vê şêwazê çêtir rave bikin, me kînetîka kombûna metabolîk a rêyên fenolamîd û 17-HGL-DTG yên ku berê hatine nîqaş kirin bêtir şopand. Enduksiyona taybetî ya OS ya gihaxwaran di nav metabolîzma fenolamîdê de vediguhere şêwazek ji nû ve rêzkirinê ya cûda (Wêne S3). Amîdên fenolîk ên ku beşên kumarîn û kafeoîl dihewînin bi tercîhî ji hêla OSS1 ve têne çalak kirin, di heman demê de OSM çalakkirina çalakkirina taybetî ya konjugatên ferulîl dikin. Ji bo rêça 17-HGL-DTG, çalakkirina OS ya cûda bi malonîlasyona jêrîn û hilberên dîmalonîlasyonê hate tespît kirin (Wêne S3).
Piştre, me plastîkbûna transkrîptomê ya ji hêla OS-ê ve hatî çêkirin bi karanîna daneyên mîkroarraya dem-kursê lêkolîn kir, ku karanîna OSM-an ji bo dermankirina pelên nebata rozetê di gihaxwaran de simul dike. Kînetîka nimûnegirtinê bi giranî bi kînetîka ku di vê lêkolîna metabolomîkê de hatî bikar anîn re li hev dike (35). Li gorî ji nû ve veavakirina metabolomê ku tê de plastîkbûna metabolîk bi taybetî bi demê re zêde dibe, em teqînên transkrîpsiyonê yên demkî di pelên ku ji hêla Ms ve têne çêkirin de dibînin, ku tê de teşwîqkirina transkrîptomê (RDPI) û pisporbûn (δj) li 1-ê ne. Di vê nuqteyê de zêdebûnek girîng di demjimêran û cûrbecûrbûnê (Hj) de hebû, îfadeya BMP1 bi girîngî kêm bû, dûv re jî rihetbûna pisporbûna transkrîptomê hat (Wêne S4). Malbatên genên metabolîk (wek P450, glîkozîltransferaz, û BAHD acîltransferaz) di pêvajoya komkirina metabolîtên taybetî ji yekîneyên avahîsaziyê yên ji metabolîzma seretayî hatine wergirtin de beşdar dibin, li gorî modela pisporbûna bilind a zû ya jorîn. Wekî lêkolînek dozê, rêça fenîlalanînê hate analîz kirin. Analîzê piştrast kir ku genên bingehîn ên di metabolîzma fenolamîdê de li gorî nebatan ku nayên kişandin, di gihaxwaran de pir bi OS-ê ve têne çalakkirin, û di şêwazên îfadeya xwe de nêzîkî hev in. Faktora transkrîpsiyonê MYB8 û genên avahîsaziyê PAL1, PAL2, C4H û 4CL di jora vê rêyê de destpêkirina zû ya transkrîpsiyonê nîşan dan. Asîltransferazên ku di kombûna dawîn a fenolamîdê de rolek dilîzin, wek AT1, DH29, û CV86, şêwazek dirêj a zêdebûnê nîşan didin (Wêneya S4). Çavdêriyên jorîn nîşan didin ku destpêkirina zû ya pisporiya transkrîptomê û zêdekirina paşê ya pisporiya metabolomîkê moda hevgirtî ne, ku dibe ku ji ber pergala rêziknameya senkronîk be ku bersivek parastinê ya bihêz dide destpêkirin.
Ji nû ve mîhengkirina di sînyala hormona nebatan de wekî tebeqeyek rêkûpêk tevdigere ku agahdariya gihaxwar entegre dike da ku fîzyolojiya nebatan ji nû ve bername bike. Piştî simulasyona gihaxwar, me dînamîkên berhevkirî yên kategoriyên sereke yên hormona nebatan pîvand û hev-îfadekirina demkî di navbera wan de dîtbarî kir [koefîsyenta korelasyona Pearson (PCC)> 0.4] (Wêne 3A). Wekî ku tê hêvîkirin, hormonên nebatan ên bi bîyosentezê ve girêdayî di nav tora hev-îfadekirina hormona nebatan de girêdayî ne. Wekî din, taybetmendiya metabolîk (îndeksa Si) bi vê torê ve tê nexşekirin da ku hormonên nebatan ên ku ji hêla dermankirinên cûda ve têne çêkirin ronî bike. Du deverên sereke yên bersiva taybetî ya gihaxwar têne xêzkirin: yek di koma JA de ye, ku JA (forma wê ya biyolojîkî çalak JA-Ile) û derivatîfên din ên JA xala Si ya herî bilind nîşan didin; ya din etîlen (ET) ye. Gibberellin tenê zêdebûnek nerm di taybetmendiya gihaxwar de nîşan da, di heman demê de hormonên din ên nebatan, wekî sîtokînîn, oksîn, û asîda absîsîk, taybetmendiya enduksiyonê ya kêm ji bo gihaxwaran hebû. Li gorî bikaranîna W + W bi tenê, zêdekirina nirxa lûtkeya derivatîfên JA bi rêya sepana OS (W + OS) dikare bi bingehîn veguhere nîşaneyek taybetî ya bihêz a JAyan. Bi awayekî nediyar, tê zanîn ku OSM û OSS1 bi naveroka elicerê ya cûda dibin sedema kombûna wekhev a JA û JA-Ile. Berevajî OSS1, OSM bi taybetî û bi hêz ji hêla OSM ve tê teşwîqkirin, lê OSS1 bersiva birînên bingehîn zêde nake (Wêne 3B).
(A) Analîza tora hev-îfadekirinê li ser bingeha hesabkirina PCC ya simulasyona kînetîka kombûna hormona nebatan a ji hêla gihaxwar ve hatî çêkirin. Girêk hormonek nebatan a yekane temsîl dike, û mezinahiya girêkê nîşana Si ya taybetî ya hormona nebatan di navbera dermanan de temsîl dike. (B) Berhevkirina JA, JA-Ile û ET di pelan de ji ber dermankirinên cûda yên ku bi rengên cûda têne destnîşan kirin: qeysî, W + OSM; şîn, W + OSSl; reş, W + W; gewr, C (kontrol). Stêrk cûdahiyên girîng di navbera dermankirin û kontrolê de nîşan didin (ANOVA-ya du-alî û dûv re berhevdana pirjimar a Tukey HSD piştî hoc, *** P <0.001). Analîza teoriya agahdariyê ya (C)697 MS/MS (pelê daneyan S1) di bîyosenteza JA û spektruma têgihîştina xirabkirî (irAOC û irCOI1) û (D)585 MS/MS (pelê daneyan S1) di ETR1 de bi sînyala ET ya xirabkirî. Du dermankirinên gihaxwar ên simulasyonkirî xetên nebatan û nebatan kontrolê yên wesayîta vala (EV) çalak kirin. Stêrkên nîşankirî cudahîyên girîng di navbera dermankirina W+OS û kontrola bê zirar de nîşan didin (ANOVA-ya du-alî û dû re jî berawirdkirina pirjimar a Tukey HSD piştî hoc, *P<0.05, **P<0.01 û ***P<0.001). (E) Grafîkên belavbûyî yên dijberiya belavbûyî ya li hember pisporbûnê. Reng şaneyên cûda yên guherandî yên genetîkî temsîl dikin; sembol rêbazên dermankirinê yên cûda temsîl dikin: sêgoşe, W + OSS1; çargoşe, W + OSM; çembera C
Piştre, em cureyekî genetîkî yê guhertî yê Nepenthesên qelskirî (irCOI1 û sETR1) di gavên sereke yên bîyosenteza JA û ET (irAOC û irACO) û têgihîştinê (irCOI1 û sETR1) de bikar tînin da ku metabolîzma van her du hormonên nebatan li ser gihaxwaran analîz bikin. Beşdariya nisbî ya ji nû ve bernamekirinê. Li gorî ceribandinên berê, me teşwîqkirina gihaxwar-OS di nebatan de hilgirên vala (EV) piştrast kir (Wêne 3, C heta D) û kêmbûna giştî ya di endeksa Hj de ku ji hêla OSM ve hatî çêkirin, di heman demê de endeksa δj zêde bû. Bersiv ji bersiva ku ji hêla OSS1 ve hatî çêkirin diyartir e. Grafîkek du-xêzî ku Hj û δj wekî koordînat bikar tîne deregulasyona taybetî nîşan dide (Wêne 3E). Trenda herî eşkere ev e ku di cureyên ku sînyala JA tune ne, cûrbecûr metabolom û guhertinên pisporbûnê yên ji hêla gihaxwaran ve têne çêkirin hema hema bi tevahî têne rakirin (Wêne 3C). Berevajî vê, têgihîştina ET ya bêdeng di nebatan sETR1 de, her çend bandora giştî li ser guhertinên di metabolîzma gihaxwar de ji ya sînyala JA pir kêmtir be jî, cûdahiya di navnîşên Hj û δj de di navbera teşwîqên OSM û OSS1 de kêm dike (Wêne 3D û Wêne S5). . Ev nîşan dide ku ji bilî fonksiyona bingehîn a veguheztina sînyala JA, veguheztina sînyala ET di heman demê de wekî mîhengkirina bersivek metabolîk a taybetî ya cureyê gihaxwar jî xizmet dike. Li gorî vê fonksiyona mîhengkirina baş, di teşwîqkirina metaboloma giştî de di nebatan sETR1 de ti guhertinek çênebû. Ji hêla din ve, li gorî nebatan sETR1, nebatan irACO amplîtûdên giştî yên wekhev ên guhertinên metabolîk ên ji hêla gihaxwar ve hatine çêkirin çêkirin, lê di navbera pirsgirêkên OSM û OSS1 de puanên Hj û δj yên pir cûda nîşan dan (Wêne S5).
Ji bo destnîşankirina metabolîtên taybetî yên ku beşdarîyên girîng di bersiva taybetî ya cureyan a gihaxwaran de dikin û hilberîna wan bi rêya sînyalên ET-ê baştir bikin, me rêbaza MS/MS-ya avahîsaziyê ya berê hatî pêşve xistin bikar anî. Ev rêbaz ji bo ji nû ve destnîşankirina malbata metabolîk ji perçeyên MS/MS [berhema xala normalîzekirî (NDP)] û puana wekheviyê li ser bingeha windabûna bêalî (NL) xwe dispêre rêbaza du-komkirinê. Seta daneyên MS/MS-ê ya ku bi rêya analîza xetên transgenîk ên ET-ê hatî çêkirin 585 MS/MS (pelê daneyê S1) hilberand, ku bi komkirina wan di heft modulên sereke yên MS/MS (M) de hate çareser kirin (Wêne 4A). Hin ji van modulan bi metabolîtên taybetî yên berê hatine taybetmendîkirin pir dagirtî ne: mînakî, M1, M2, M3, M4 û M7 dewlemend in bi derivatîfên fenol ên cûrbecûr (M1), glîkozîdên flavonoîd (M2), şekirên asîl (M3 Û M4), û 17-HGL-DTG (M7). Herwiha, agahdariya taybetî ya metabolîk (îndeksa Si) ya metabolîtek yekane di her modulê de tê hesibandin, û belavbûna Si ya wê dikare bi awayekî întuîtîv were dîtin. Bi kurtasî, spektrumên MS/MS yên ku taybetmendiya gihaxwarin û genotîpê ya bilind nîşan didin bi nirxên Si yên bilind têne xuyang kirin, û statîstîkên kurtozê belavbûna porê li quncikê rastê yê dûvikê nîşan didin. Yek ji van belavbûna koloid a bêrûn di M1 de hate tespît kirin, ku tê de fenol amîd rêjeya Si ya herî bilind nîşan da (Wêne 4B). 17-HGL-DTG ya gihaxwar a ku berê di M7 de hatî behs kirin, xalek Si ya nerm nîşan da, ku pileya nerm a rêziknameya cûda di navbera her du celebên OS de nîşan dide. Berevajî vê, piraniya metabolîtên taybetî yên ku bi awayekî domdar têne hilberandin, wekî rutîn, CGA, û şekirên asîl, di nav xalên Si yên herî nizm de ne. Ji bo ku tevliheviya avahî û belavbûna Si di navbera metabolîtên taybetî de çêtir were lêkolîn kirin, ji bo her modulê toreke molekulî hate çêkirin (Wêne 4B). Pêşbîniyek girîng a teoriya OD (ku di Wêne 1B de hatiye kurtkirin) ev e ku ji nû ve rêxistinkirina metabolîtên taybetî piştî gihaxwarinê divê bibe sedema guhertinên yekalî di metabolîtan de bi nirxa parastinê ya bilind, nemaze bi zêdekirina taybetmendiya wan (berevajî belavkirina rasthatî) Mod) Metabolîta parastinê ya ku ji hêla teoriya MT ve hatî pêşbînîkirin. Piraniya derivatîfên fenolê yên ku di M1 de kom bûne bi fonksiyonel bi kêmbûna performansa kêzikan ve girêdayî ne (32). Dema ku nirxên Si di metabolîtên M1 de di navbera pelên çalakkirî û pelên pêkhatî yên nebatan kontrolê EV de di 24 demjimêran de têne berhev kirin, me dît ku taybetmendiya metabolîk a gelek metabolîtan piştî kêzikên gihaxwar xwedî meyleke zêdebûnê ya girîng e (Wêne 4C). Zêdebûna taybetî ya nirxa Si tenê di fenolamîdên parastinê de hate tespît kirin, lê di fenolên din û metabolîtên nenas ên ku di vê modulê de bi hev re dijîn de zêdebûnek di nirxa Si de nehat tespît kirin. Ev modelek pispor e, ku bi teoriya OD ve girêdayî ye. Pêşbîniyên sereke yên guhertinên metabolîk ên ku ji hêla gihaxwaran ve têne çêkirin lihevhatî ne. Ji bo ceribandina ka ev taybetmendiya spektruma fenolamîdê ji hêla ET-ya taybetî ya OS-ê ve hatî çêkirin an na, me endeksa metabolîta Si xêz kir û nirxek îfadeya cûda di navbera OSM û OSS1 de di genotîpên EV û sETR1 de çêkir (Wêne 4D). Di sETR1 de, cûdahiya ku ji hêla fenamidê ve di navbera OSM û OSS1 de hatî çêkirin pir kêm bû. Rêbaza du-komkirinê jî li ser daneyên MS/MS-ê yên ku di şaneyên bi JA-ya têr de hatine berhev kirin hate sepandin da ku modulên sereke yên MS/MS-ê yên têkildarî pisporiya metabolîk a birêkûpêk a JA-yê werin derxistin (Wêne S6).
(A) Encamên komkirina 585 MS/MS-ê li ser bingeha perçeya hevpar (wekheviya NDP) û windabûna bêalî ya hevpar (wekheviya NL) dibin sedema ku modul (M) bi malbata pêkhateyên naskirî re lihevhatî be, an jî bi pêkhateya metabolîtê ya nenas an jî bi metabolîzekirina kêm. Li kêleka her modulê, belavbûna taybetî ya metabolîtê (MS/MS) (Si) tê nîşandan. (B) Tora molekulî ya modular: Girêk MS/MS û qiraxan temsîl dikin, puanên MS/MS yên NDP (sor) û NL (şîn) (qutkirin, > 0.6). Îndeksa taybetmendiya metabolîtê ya pilekirî (Si) li gorî modulê (çep) rengkirî ye û bi tora molekulî (rast) ve hatiye nexşandin. (C) Modula M1 a nebata EV di rewşa damezrîner (kontrol) û handerkirî (gihaxwarê simulasyonkirî) de di 24 demjimêran de: diyagrama tora molekulî (nirxa Si mezinahiya girêkê ye, fenolamîda parastinê bi şîn tê ronîkirin). (D) Diyagrama tora molekulî ya M1 ya xeta spektrumê sETR1 bi têgihîştina EV û ET ya lawaz: pêkhateya fenolîk a ku ji hêla girêka xeleka kesk ve tê temsîl kirin, û cûdahiya girîng (nirxa P) di navbera dermankirinên W + OSM û W + OSS1 de wekî mezinahiya Girêkê. CP, N-caffeoyl-tyrosine; CS, N-caffeoyl-spermidine; FP, N-ferulyl-asîd ester-asîda urîk; FS, N-ferulyl-spermidine; CoP, N', N “-Coumarolyl-tyrosine; DCS, N', N”-dicaffeoyl-spermidine; CFS, N', N”-caffeoyl, feruloyl-spermidine; Lycium barbarum di wolfberry Son de; Nick. O-AS, şekirê O-asyl.
Me analîz ji genotîpek Nepenthes a yekane ya qelskirî berfirehtir kir bo nifûsên xwezayî, ku guhertinên nav-taybetî yên bihêz di asta JA ya gihaxwar û asta metabolîtên taybetî de berê di nifûsên xwezayî de hatine vegotin (26). Vê koma daneyan bikar bînin da ku 43 germplazmayan veşêrin. Ev germplazma ji 123 cureyên nebatan ji N. pallens pêk tên. Ev nebat ji tovên ku li jîngehên xwecihî yên cûda li Utah, Nevada, Arizona, û Kalîforniyayê hatine berhevkirin (Wêneya S7), me cihêrengiya metabolomê (li vir jê re asta nifûsê tê gotin) cihêrengiya β) û pisporiya ji ber OSM-ê hesab kir. Li gorî lêkolînên berê, me rêzek fireh ji guhertinên metabolîk li ser eksên Hj û δj dît, ku nîşan dide ku germplazma di plastîkbûna bersivên xwe yên metabolîk de ji bo gihaxwaran cûdahiyên girîng hene (Wêneya S7). Ev rêxistin çavdêriyên berê yên li ser rêza dînamîk a guhertinên JA yên ji ber gihaxwaran çêbûne tîne bîra mirov, û di nifûsek yekane de nirxek pir bilind parastiye (26, 36). Bi karanîna JA û JA-Ile ji bo ceribandina têkiliya asta giştî ya di navbera Hj û δj de, me dît ku têkiliyek erênî ya girîng di navbera JA û îndeksa cihêrengî û pisporbûna metabolome β de heye (Wêne S7). Ev yek nîşan dide ku heterojenîteya ji hêla gihaxwaran ve di enduksiyona JA-yan de ku di asta nifûsê de hatî tespît kirin, dibe ku ji ber polîmorfîzmên metabolîk ên sereke yên ku ji ber hilbijartina ji kêzikên gihaxwar çêdibin be.
Lêkolînên berê nîşan dane ku celebên titûnê di cure û girêdayîbûna nisbî ya li ser parastinên metabolîk ên çêkirî û damezrîner de pir ji hev cûda dibin. Bawer tê kirin ku ev guhertinên di veguhestina sînyala dij-gihaxwar û kapasîteyên parastinê de ji hêla zexta nifûsa kêzikan, çerxa jiyana nebatan, û lêçûnên hilberîna parastinê di nîşa ku cureyek diyarkirî lê mezin dibe de têne rêve kirin. Me lihevhatina ji nû ve çêkirina metaboloma pelan a ji hêla gihaxwarên şeş cureyên Nicotiana yên xwecihî Amerîkaya Bakur û Amerîkaya Başûr ve hatî çêkirin lêkolîn kir. Ev cure bi Nepenthes Amerîkaya Bakur re, ango Nicotiana Bociflo, bi hev re xizmên nêzîk in. La, N. nicotinis, giyayê qelskirî yê Nicotiana n., Nicotiana tabacum, titûna xêzik, titûn (Nicotiana spegazzinii) û titûna pelên titûnê (Nicotiana obtusifolia) (Wêne 5A) (37). Şeş ji van cureyan, di nav de cureya baş-taybetkirî N. please, nebatên salane yên koma petunia ne, û obtusifolia N. nebatên pirrsalî yên koma xwişk Trigonophyllae ne (38). Paşê, enduksiyona W + W, W + OSM û W + OSS1 li ser van heft cureyan hate kirin da ku ji nû ve rêzkirina metabolîk a xwarina kêzikan a li ser asta cureyan were lêkolîn kirin.
(A) Dareke fîlojenetîk a bootstrap li ser bingeha îhtîmala herî zêde [ji bo senteza glutamine ya navokî (38)] û belavbûna erdnîgarî ya heft cureyên Nicotiana yên nêzîk (rengên cûda) (37). (B) Nexşeya belavbûnê ya cihêrengiya pispor ji bo profîlên metabolîk ên heft cureyên Nicotiana (939 MS/MS; pelê daneyan S1). Di asta cureyan de, cihêrengiya metabolomê bi asta pisporbûnê re bi awayekî neyînî ve girêdayî ye. Analîza têkiliya asta cureyan di navbera cihêrengiya metabolîk û pisporbûnê û kombûna JA de di Wêne 2 de tê nîşandan. S9. Reng, cureyên cûda; sêgoşe, W + OSS1; çargoşe, W + OSM; (C) Dînamîkên JA û JA-Ile yên Nicotiana li gorî amplîtuda teşwîqkirina OS têne rêzkirin (ANOVA-ya du-alî û berhevdana Tukey HSD piştî-pirjimar, * P <0.05, ** P <0.01 û * ** Ji bo berhevdana W + OS û W + W, P <0.001). Nexşeya qutiyê ya cûrbecûrîya (D) û pisporbûna (E) ya her cureyî piştî simulasyona gihaxwer û metîl JA (MeJA). Stêrk cûdahiya girîng di navbera W + OS û W + W an lanolin plus W (Lan + W) an Lan plus MeJA (Lan + MeJa) û kontrola Lan de nîşan dide (analîza du-alî ya guherînê, piştre berawirdkirina pirjimar a HSD ya Tukey piştî hoc, *P<0.05, **P<0.01 û ***P<0.001).
Bi karanîna rêbaza dual cluster, me 9 modulên ji 939 MS/MS (pelê daneyê S1) destnîşan kirin. Pêkhateya MS/MS-ê ku ji hêla dermankirinên cûda ve ji nû ve hatî mîheng kirin, di navbera modulên cûda de di navbera cureyan de pir diguhere (Wêneya S8). Dîtbarîkirina Hj (ku li vir wekî cûrbecûrbûna γ-ya asta cureyan tê binavkirin) û δj eşkere dike ku cureyên cûda di qada metabolîk de di nav komên pir cûda de kom dibin, ku dabeşkirina asta cureyan bi gelemperî ji hejandinê bêtir diyar e. Ji bilî N. linear û N. obliquus, ew rêzek dînamîk a fireh a bandorên înduksiyonê nîşan didin (Wêneya 5B). Berevajî vê, cureyên wekî N. purpurea û N. obtusifolia bersivek metabolîk a kêmtir eşkere ji bo dermankirinê hene, lê metabolom cihêrengtir e. Belavbûna taybetî ya cureyan a bersiva metabolîk a înduktîf bû sedema têkiliyek neyînî ya girîng di navbera pisporbûn û cûrbecûrbûna gama de (PCC = -0.46, P = 4.9×10-8). Guhertinên di asta JA-yan de yên ji ber OS-ê bi awayekî erênî bi pisporbûna metabolomê re têkildar in, û bi awayekî neyînî bi cihêrengiya gama metabolîk a ku ji hêla her cureyê ve tê nîşandan re têkildar in (Wêne 5B û Wêne S9). Hêjayî gotinê ye ku cureyên ku di Wêne 5C de wekî cureyên "bersiva sînyalê" têne binavkirin, wek Nepenthes nematodes, Nepenthes nepenthes, Nepenthes acute, û Nepenthes attenuated, di 30 hûrdeman de nîşanên girîng çêkirin. Belavbûnên JA û JA-Ile yên taybetî yên OS-ê yên dawî, di heman demê de bakteriyên din ên ku wekî "bersiva sînyalê bêbersiv" têne binavkirin, wek Nepenthes mills, Nepenthes toz û N. obtusifolia tenê enduksiyona JA-Ile Edge bêyî tu taybetmendiya OS nîşan didin (Wêne 5C). Di asta metabolîk de, wekî ku li jor hatî behs kirin, ji bo Nepenthesên attenuated, madeyên bersivdayî yên sînyalê taybetmendiya OS nîşan dan û δj bi girîngî zêde kirin, di heman demê de Hj kêm kirin. Ev bandora amadekirina taybetî ya OS-ê di cureyên ku wekî cureyên sînyala-ne-reaktîf hatine dabeşkirin de nehat tespîtkirin (Wêne 5, D û E). Metabolîtên taybetî yên OS-ê di navbera cureyên bersivdayî yên sînyalê de pirtir têne parve kirin, û ev komên sînyalê bi cureyên bi bersivên sînyalê yên qelstir re kom dibin, di heman demê de cureyên bi bersivên sînyalê yên qelstir kêmtir girêdayîbûnek nîşan didin (Wêne S8). Ev encam nîşan dide ku enduksiyona taybetî ya OS-ê ya JA-yan û ji nû ve mîhengkirina taybetî ya OS-ê ya metaboloma jêrîn di asta cureyan de bi hev ve girêdayî ne.
Piştre, me ji bo dermankirina nebatan pasteyek lanolînê ku metîl JA (MeJA) tê de heye bikar anî da ku lêkolîn bikin ka ev modên girêdanê ji hêla hebûna JA-ya ku ji hêla JA-ya eksojen ve tê sepandin, ku dê di sîtoplazmaya nebatan de be, ve têne sînordar kirin. Deesterîfîkasyona bilez JA ye. Me heman meyla guherîna hêdî ji cureyên bersivdayî yên sînyalê berbi cureyên bersivdayî yên sînyalê ku ji ber dabînkirina domdar a JA-yê çêdibe dît (Wêne 5, D û E). Bi kurtasî, dermankirina MeJA metabolomên nematodên xêzik, N. obliquus, N. aquaticus, N. pallens, û N. mikimotoi bi tundî ji nû ve bername kir, ku di encamê de zêdebûnek girîng di δj û kêmbûnek di Hj de çêbû. N. purpurea tenê zêdebûnek di δj de nîşan da, lê Hj ne. N. obtusifolia, ku berê hatiye nîşandan ku astên pir kêm ên JA-yan kom dike, di warê ji nû ve mîhengkirina metabolomê de jî bersivek xirab dide dermankirina MeJA. Ev encam nîşan didin ku hilberîna JA an veguheztina sînyalê di cureyên bersivdayî yên sînyalê de bi fîzyolojîkî sînordar e. Ji bo ceribandina vê hîpotezê, me çar cure (N. pallens, N. mills, N. pink û N. microphylla) lêkolîn kirin ku ji hêla W + W, W + OSM û W + OSS1 Transcriptome ve hatine çêkirin (39). Li gorî şêwaza ji nû ve çêkirina metabolomê, cure di qada transkrîptomê de baş ji hev cuda ne, ku di nav wan de N. attenuated RDPI-ya herî bilind a ji hêla OS ve hatî çêkirin nîşan da, di heman demê de N. gracilis ya herî nizm hebû (Wêne 6A). Lêbelê, hat dîtin ku cihêrengiya transkrîptomê ya ku ji hêla N. oblonga ve hatî çêkirin di nav çar cureyan de ya herî nizm bû, berevajî cihêrengiya metabonomîk a herî bilind a N. oblonga ku berê di heft cureyan de hatibû nîşandan. Lêkolînên berê nîşan dane ku komek genên têkildarî sînyalên parastina zû, di nav de sînyalên JA, taybetmendiya bersivên parastina zû yên ku ji hêla elîktorên têkildarî gihaxwaran ve di cureyên Nicotiana de têne çêkirin rave dike (39). Berawirdkirina rêyên sînyala JA di navbera van çar cureyan de şêwazek balkêş eşkere kir (Wêne 6B). Piraniya genên di vê rêyê de, wek AOC, OPR3, ACX û COI1, di van çar cureyan de astên nisbeten bilind ên enduksîyonê nîşan dan. Lêbelê, genek sereke, JAR4, JA vediguherîne forma wê ya biyolojîkî çalak a transkrîptên kombûyî yên JA-Ile, û asta transkrîpsiyona wê pir kêm e, nemaze di N. mills, Nepenthes pieris û N. microphylla de. Wekî din, tenê transkrîpta genek din AOS di N. bifidum de nehat tespît kirin. Ev guhertinên di îfadeya genan de dibe ku berpirsiyarê fenotipên tund ên ku ji hêla hilberîna JA ya kêm ve di cureyên sînyala anerjîk de û enduksîyona N. gracilis ve têne çêkirin bin.
(A) Analîza teoriya agahdariyê ya ji nû ve bernamekirina bersivên transkrîpsiyonê yên zû yên çar cureyên titûnê yên nêzîk ên ku 30 hûrdem piştî destpêkirina gihaxwarinê hatine nimûnekirin. RDPI bi berhevdana pelên ku ji hêla OS-ya gihaxwar ve bi kontrola birînê ve hatine çêkirin tê hesibandin. Reng cureyên cûda nîşan didin, û sembol rêbazên dermankirinê yên cûda nîşan didin. (B) Analîza îfadeya genê di rêyên sînyala JA de di navbera çar cureyan de. Rêya JA ya hêsankirî li kêleka nexşeya qutiyê tê nîşandan. Rengên cûda rêbazên pêvajoyê yên cûda nîşan didin. Stêrk nîşan dide ku di navbera dermankirina W + OS û kontrola W + W de cûdahiyek girîng heye (ji bo testa t-ya Xwendekar ji bo cûdahiyên cot-cot, *P<0.05, **P<0.01 û ***P<0.001). OPDA, asîda 12-oksofîtodîenoîk; OPC-8: asîda 0,3-okso-2(2′(Z)-pentenîl)-sîklopentan-1-oktanoîk.
Di beşa dawî de, me lêkolîn kir ka çawa ji nû ve çêkirina metabolomê ya cureyên nebatan ên li gorî cureyên kêzikan dikare li hember gihaxwaran berxwedêr be. Lêkolînên berê li ser cinsê Nicotiana tekez kirin. Berxwedana wan a li hember Ms û larvayan pir ji hev cuda ye (40). Li vir, me têkiliya di navbera vê modelê û plastîkbûna wan a metabolîk de lêkolîn kir. Bi karanîna çar cureyên titûnê yên jorîn, û ceribandina têkiliya di navbera cûrbecûr û pisporbûna metabolomê ya ji hêla gihaxwaran ve hatî çêkirin û berxwedana nebatan a li hember Ms û Sl de, me dît ku berxwedan, cûrbecûr û pisporbûn ji bo Sl ya giştî bi awayekî erênî ve girêdayî ne, lê têkiliya di navbera berxwedana li hember jinên pispor û pisporbûnê de qels e, û têkiliya bi cûrbecûr re ne girîng e (Wêne S10). Di derbarê berxwedana S1 de, hem N. chinensis û hem jî N. gracilis ên qelsbûyî, ku berê hatine nîşandan ku hem astên veguheztina sînyala JA û hem jî plastîkbûna metabolomê nîşan didin, bersivên pir cûda ji bo înduksiyona gihaxwaran hebûn, û wan jî berxwedanek bilind a wekhev nîşan da. Zayend.
Di şêst salên borî de, teoriya parastina nebatan çarçoveyek teorîk peyda kiriye, ku li ser bingeha wê lêkolîneran hejmareke girîng ji pêşveçûn û fonksiyonên metabolîtên taybetî yên nebatan pêşbînî kirine. Piraniya van teoriyan prosedûra normal a encamên bihêz naşopînin (41). Ew pêşbîniyên sereke di heman astê analîzê de pêşniyar dikin (3). Dema ku ceribandina pêşbîniyên sereke dihêle ku teoriyên taybetî werin analîzkirin, ev ê bibe sedema ku qad ber bi pêş ve diçe. Piştgirî were dayîn, lê yên din red bike (42). Di şûna wê de, teoriya nû di astên cûda yên analîzê de pêşbîniyan dike û tebeqeyek nû ya nirxandinên raveker lê zêde dike (42). Lêbelê, her du teoriyên ku di asta fonksiyonel de têne pêşniyar kirin, MT û OD, dikarin bi hêsanî wekî pêşbîniyên girîng ên guhertinên metabolîk ên taybetî yên ku ji hêla gihaxwaran ve têne çêkirin werin ravekirin: Teoriya OD bawer dike ku guhertinên di "cîhê" metabolîk a taybetî de pir arasteyî ne. Teoriya MT bawer dike ku ev guhertin dê ne-arasteyî bin û bi rengek rasthatî di cîhê metabolîk de cih bigirin, û meyla wan heye ku metabolîtên nirxa parastinê ya bilind hebin. Lêkolînên berê yên pêşbîniyên OD û MT bi karanîna komek teng a pêkhateyên "parastinê" yên a priori hatine ceribandin. Ev testên navendî yên metabolîtan rê li ber şiyana analîzkirina rêjeyê û rêça ji nû ve konfigurasyona metabolomê di dema gihaxwarinê de digirin, û nahêlin ku ceribandin di çarçoveyek statîstîkî ya domdar de pêşbîniyên sereke hewce bike ku dikarin wekî tevahî werin hesibandin. Guhertinên di metabolomê nebatan de bihejmêrin. Li vir, me teknolojiya nûjen di metabolomîkê de li ser bingeha MS-ya hesabker bikar anî û analîza MS-ya dekonvolasyonê di diravê giştî yê danasînên teoriya agahdariyê de pêk anî da ku cûdahiya di navbera her duyan de ku di asta metabolomîkê ya gerdûnî de têne pêşniyar kirin biceribînin. Pêşbîniya sereke ya vê teoriyê. Teoriya agahdariyê di gelek waran de hatiye sepandin, nemaze di çarçoveya lêkolîna biyolojîk û herikîna xurekê de (43). Lêbelê, bi qasî ku em dizanin, ev yekem serlêdana ku ji bo danasîna qada agahdariya metabolîk a nebatan û çareserkirina pirsgirêkên ekolojîk ên têkildarî guhertinên metabolîk ên demkî di bersiva nîşanên jîngehê de tê bikar anîn. Bi taybetî, şiyana vê rêbazê di şiyana wê de ye ku qalibên di nav û di navbera cureyên nebatan de bide ber hev da ku lêkolîn bike ka gihaxwar çawa ji cureyên cûda berbi qalibên makroevolasyonê yên nav-cureyî di astên cûda yên pêşveçûnê de pêş ketine. Metabolîzm.
Analîza pêkhateya sereke (PCA) komek daneyên pirguherbar vediguherîne qadeke kêmkirina pîvanan da ku meyla sereke ya daneyan were ravekirin, ji ber vê yekê ew bi gelemperî wekî teknîkek lêgerînê tê bikar anîn da ku koma daneyan parçe bike, wekî metaboloma dekonvolasyonê. Lêbelê, kêmkirina pîvanan dê beşek ji naveroka agahdariyê di koma daneyan de winda bike, û PCA nikare agahdariya hejmarî li ser taybetmendiyên ku bi taybetî ji bo teoriya ekolojîk girîng in peyda bike, wek: çawa gihaxwar cûrbecûr di warên taybetî de ji nû ve mîheng dikin (mînakî, dewlemendî, belavkirin) û pirbûn) metabolîtan? Kîjan metabolîtan pêşbînkerên rewşa teşhîrkirî ya gihaxwarek diyarkirî ne? Ji perspektîfa taybetmendî, cihêrengî û teşhîrkirinê, naveroka agahdariyê ya profîla metabolîta pel-taybetî tê hilweşandin, û tê dîtin ku xwarina gihaxwaran dikare metabolîzma taybetî çalak bike. Bi awayekî nediyar, me dît ku, wekî ku di nîşaneyên teoriya agahdariyê yên hatine bicîh kirin de hatî vegotin, rewşa metabolîk a encam piştî êrîşên her du gihaxwaran (generalîstê şevê yê xwedî xwarin Sl) û pispora Solanaceae Ms. hevgirtinek mezin heye. Her çend tevger û konsantrasyona xwarina wan bi girîngî cûda be. Destpêkerê konjugata asîda rûn-asîda amînî (FAC) di OS de (31). Bi karanîna OS-ya gihaxwar ji bo dermankirina birînên qulkirinê yên standardkirî, dermankirina gihaxwar a simulasyonkirî jî meyleke wekhev nîşan da. Ev prosedûra standardkirî ji bo simulasyona bersiva nebatan li hember êrîşên gihaxwar faktorên tevlihev ên ji ber guhertinên di tevgerên xwarinê yên gihaxwaran de çêdibin, ku di demên cûda de dibin sedema pileyên cûda yên zirarê, ji holê radike (34). FAC, ku wekî sedema sereke ya OSM tê zanîn, bersivên JAS û hormonên nebatan ên din di OSS1 de kêm dike, di heman demê de OSS1 bi sedan caran kêm dike (31). Lêbelê, OSS1 li gorî OSM astên wekhev ên kombûna JA çêkir. Berê hatiye nîşandan ku bersiva JA di Nepenthesên qelskirî de ji OSM re pir hesas e, ku FAC dikare çalakiya xwe biparêze her çend bi avê 1:1000 were şil kirin jî (44). Ji ber vê yekê, li gorî OSM, her çend FAC di OSS1 de pir kêm be jî, ew bes e ku bibe sedema belavbûna JA ya têr. Lêkolînên berê nîşan dane ku proteînên dişibin porînê (45) û olîgosakarîd (46) dikarin wekî nîşanên molekulî werin bikar anîn da ku bersivên parastina nebatan di OSS1 de bidin destpêkirin. Lêbelê, hîn jî ne diyar e ka ev elîktorên di OSS1 de berpirsiyarê kombûna JA-yê ne ku di lêkolîna heyî de têne dîtin.
Her çend lêkolînên hindik hene ku şopa tiliyên metabolîk ên cuda yên ku ji ber sepandina gihaxwarên cûda an JA an SA ya eksojen (asîda salîsîlîk) (47) çêdibin vedibêjin jî, kesî têkçûna taybetî ya cureyên gihaxwaran di tora giyayê nebatan de û bandorên wê li ser agahdariya kesane ya taybetî nexapandiye. Bandora giştî ya metabolîzmê bi awayekî sîstematîk tê lêkolîn kirin. Vê analîzê bêtir piştrast kir ku girêdana tora hormonê ya navxweyî bi hormonên nebatan ên din ji bilî JA-yan taybetmendiya ji nû ve organîzekirina metabolîk a ji hêla gihaxwaran ve çêdibe şekil dide. Bi taybetî, me tespît kir ku ET-ya ji hêla OSM-ê ve ji ya ji hêla OSS1-ê ve çêdibe pir mezintir bû. Ev mod bi naveroka FAC-ya bêtir di OSM-ê de lihevhatî ye, ku şertek pêwîst û têrker e ji bo destpêkirina teqîna ET-ê (48). Di çarçoveya têkiliya di navbera nebatan û gihaxwaran de, fonksiyona sînyalê ya ET-ê li ser dînamîkên metabolîtên taybetî yên nebatan hîn jî sporadîk e û tenê komek pêkhateyên yekane hedef digire. Herwiha, piraniya lêkolînan sepandina eksojen a ET an pêşengên wê an jî astengkerên cûrbecûr bikar anîne da ku rêkxistina ET lêkolîn bikin, ku di nav wan de ev sepanên kîmyewî yên eksojen dê gelek bandorên alî yên ne-taybetî çêbikin. Bi zanîna me, ev lêkolîn yekem lêkolîna sîstematîk a pîvanek mezin a rola ET di karanîna ET de ji bo hilberandin û têgihîştina nebatan transgenîk ên xirabkirî ji bo hevrêzkirina dînamîkên metabolomê nebatan temsîl dike. Enduksiyona ET-ya taybetî ya gihaxwaran di dawiyê de dikare bersiva metabolomê modûl bike. Ya herî girîng manîpulekirina transgenîk a genên biyosenteza ET (ACO) û têgihîştinê (ETR1) ye ku kombûna de novo ya fenolamîdan a taybetî ya gihaxwaran eşkere kir. Berê hatiye nîşandan ku ET dikare kombûna nîkotînê ya ji hêla JA ve hatî çêkirin bi rêkxistina putrescine N-methyltransferase (49) baştir bike. Lêbelê, ji hêla mekanîkî ve, ne diyar e ka ET çawa enduksiyona fenamîdê baştir dike. Ji bilî fonksiyona veguhestina sînyalê ya ET, herikîna metabolîk dikare ji bo rêkxistina veberhênana di amîdên polîamînofenol de ber bi S-adenosîl-1-metionîn ve were şandin. S-adenosîl-1-metionîn ET û navbeynkarek hevpar a rêça bîyosentezê ya polîamîn e. Mekanîzmaya ku sînyala ET asta fenolamîdê rêk dixe, pêdivî bi lêkolînek bêtir heye.
Ji bo demek dirêj, ji ber hejmareke mezin ji metabolîtên taybet ên bi avahiyeke nenas, baldariya tund a li ser kategoriyên metabolîk ên taybetî nekarî guhertinên demkî yên cihêrengiya metabolîk piştî têkiliyên biyolojîk bi hişkî binirxîne. Niha, li gorî analîza teoriya agahdariyê, encama sereke ya bidestxistina spektruma MS/MS li ser bingeha metabolîtên bêalî ev e ku gihaxwerên ku gihaxweran dixwin an jî simulasyonê dikin, cûrbecûriya metabolîk a giştî ya metaboloma pelan kêm dikin di heman demê de asta pisporiya wê zêde dikin. Ev zêdebûna demkî ya taybetmendiya metaboloma ku ji hêla gihaxweran ve çêdibe bi zêdebûnek sinerjîk a taybetmendiya transkrîptomê ve girêdayî ye. Taybetmendiya ku herî zêde beşdarî vê pisporiya metaboloma mezintir dibe (xwedî nirxek Si ya bilindtir) metabolîta taybet e ku berê fonksiyona gihaxwer a taybetmendîkirî heye. Ev model bi pêşbîniya teoriya OD re lihevhatî ye, lê pêşbîniya MT ya têkildarî bêserûberiya ji nû ve bernamekirina metaboloma ne lihevhatî ye. Lêbelê, ev dane di heman demê de bi pêşbîniya modela tevlihev re jî lihevhatî ye (MT ya çêtirîn; Wêne 1B), ji ber ku metabolîtên din ên ne-taybetmendî yên bi fonksiyonên parastinê yên nenas hîn jî dikarin belavkirinek Si ya bêserûber bişopînin.
Şêweyek girîng ku ji hêla vê lêkolînê ve bêtir tê girtin ev e ku ji asta mîkro-pêşveçûnê (nivava yekane û nifûsa titûnê) heya pîvanek pêşkeftinî ya mezintir (cureyên titûnê yên nêzîk), astên cûda yên rêxistina pêşkeftinî di "parastina çêtirîn" de ne. Di şiyanên gihaxwaran de cûdahiyên girîng hene. Moore et al. (20) û Kessler û Kalske (1) bi serbixwe pêşniyar kirin ku sê astên fonksiyonel ên biyolojîk cihêrengiyê ku di destpêkê de ji hêla Whittaker (50) ve hatine cûdakirin veguherînin guhertinên demkî yên damezrîner û çêkirî yên cihêrengiya kîmyewî; van nivîskaran ne kurt kirin. Prosedûrên ji bo berhevkirina daneyên metabolomê yên di pîvana mezin de jî diyar nakin ka meriv çawa cihêrengiya metabolîk ji van daneyan hesab dike. Di vê lêkolînê de, sererastkirinên piçûk ên li ser dabeşkirina fonksiyonel a Whittaker dê cihêrengiya α-metabolîk wekî cihêrengiya spektrên MS/MS di nebatek diyarkirî de, û cihêrengiya β-metabolîk wekî metabolîzma bingehîn a nav-taybetî ya komek nifûsan bihesibîne. Cih, û cihêrengiya γ-metabolîk dê berfirehkirina analîza cureyên wekhev be.
Sînyala JA ji bo rêzek fireh ji bersivên metabolîk ên gihaxwaran girîng e. Lêbelê, ceribandinek hejmarî ya hişk a beşdariya rêziknameya nav-taybetî ya bîyosenteza JA di cihêrengiya metabolomê de tune ye, û gelo sînyala JA cîhek giştî ye ji bo cihêrengiya metabolîk a ji ber stresê di pîvanek makroevolusyonê ya bilindtir de hîn jî ne diyar e. Me dît ku xwezaya gihaxwar a gihaxwarên Nepenthes pisporiya metabolomê çêdike û guherîna pisporiya metabolomê di nav nifûsa cureyên Nicotiana û di navbera cureyên Nicotiana yên nêzîk de bi awayekî sîstematîk bi awayekî erênî bi sînyala JA re têkildar e. Wekî din, dema ku sînyala JA têk diçe, taybetmendiya metabolîk a ku ji hêla gihaxwarek genotîpek yekane ve hatî çêkirin dê were betal kirin (Wêne 3, C û E). Ji ber ku guhertinên spektruma metabolîk ên nifûsa Nepenthes a bi xwezayî qelsbûyî bi piranî hejmarî ne, guhertinên di cihêrengiya metabolîk a β û taybetmendiya di vê analîzê de dibe ku bi piranî ji ber teşwîqkirina bihêz a kategoriyên pêkhateyên dewlemend ên metabolîtan çêbibin. Ev çînên pêkhateyan beşek ji profîla metabolomê serdest dikin û dibin sedema têkiliyek erênî bi sînyalên JA re.
Ji ber ku mekanîzmayên biyokîmyayî yên cureyên titûnê yên ku bi wê ve girêdayî ne pir cûda ne, metabolîtan bi taybetî di aliyê kalîtîf de têne destnîşankirin, ji ber vê yekê ew bêtir analîtîk e. Pêvajoya teoriya agahdariyê ya profîla metabolîk a girtî eşkere dike ku enduksiyona gihaxwar danûstandina di navbera cihêrengiya gama metabolîk û pisporbûnê de zêde dike. Sînyala JA di vê danûstandinê de rolek navendî dilîze. Zêdebûna pisporbûna metabolomê bi pêşbîniya OD ya sereke re lihevhatî ye û bi sînyala JA re bi awayekî erênî ve girêdayî ye, lê sînyala JA bi awayekî neyînî bi cihêrengiya gama metabolîk ve girêdayî ye. Ev model nîşan didin ku kapasîteya OD ya nebatan bi giranî ji hêla plastîkbûna JA ve tê destnîşankirin, çi li ser pîvanek mîkroevolusyonê be çi jî li ser pîvanek mezintir a evolusyonê be. Ceribandinên serîlêdana JA yên eksojen ên ku kêmasiyên biyosenteza JA derbas dikin bêtir eşkere dikin ku cureyên titûnê yên bi heman rengî dikarin werin cudakirin nav cureyên bersivdayî yên sînyalê û nebersivdayî yên sînyalê, mîna moda wan a JA û plastîkbûna metabolomê ya ku ji hêla gihaxwaran ve hatî çêkirin. Cureyên bêbersivdayî yên sînyalê nikarin ji ber nekarîna xwe ya hilberîna JA ya endojen bersiv bidin û ji ber vê yekê di bin sînorkirinên fîzyolojîk de ne. Ev dibe ku ji ber mutasyonên di hin genên sereke yên di rêya sînyala JA (AOS û JAR4 di N. crescens) de be. Ev encam destnîşan dike ku ev qalibên makroevolusyonê yên di navbera cureyan de dibe ku bi giranî ji hêla guhertinên di têgihîştina hormona navxweyî û bersivdayînê de ve werin rêvebirin.
Ji bilî têkiliya di navbera nebat û gihaxwaran de, lêkolîna cihêrengiya metabolîk bi hemî pêşketinên girîng ên teorîk di lêkolîna adaptasyona biyolojîkî ya li hember jîngehê û pêşveçûna taybetmendiyên fenotipîk ên tevlihev ve girêdayî ye. Bi zêdebûna mîqdara daneyên ku ji hêla amûrên MS-ê yên nûjen ve têne bidestxistin, ceribandina hîpotezê li ser cihêrengiya metabolîk naha dikare ji cûdahiyên metabolîtên takekesî/kategorî derbas bibe û analîzek gerdûnî pêk bîne da ku qalibên nediyar eşkere bike. Di pêvajoya analîza pîvana mezin de, metaforek girîng fikra afirandina nexşeyên watedar e ku dikarin ji bo lêkolîna daneyan werin bikar anîn. Ji ber vê yekê, encamek girîng a tevliheviya heyî ya metabolomîkên MS/MS yên bêalî û teoriya agahdariyê ev e ku ew metrîkek hêsan peyda dike ku dikare ji bo avakirina nexşeyan were bikar anîn da ku cihêrengiya metabolîk li ser pîvanên taksonomîk ên cûda were gerandin. Ev pêdiviya bingehîn a vê rêbazê ye. Lêkolîna pêşkeftina mîkro/makro û ekolojiya civakê.
Di asta makro-pêşveçûnê de, bingeha teoriya hev-pêşveçûnê ya nebat-kêzikan a Ehrlich û Raven (51) ew e ku pêşbînî bike ku guherîna cihêrengiya metabolîk a di navbera cureyan de sedema cihêrengiya rêzikên nebatan e. Lêbelê, di pêncî salên piştî weşandina vê xebata bingehîn de, ev hîpotez kêm caran hatiye ceribandin (52). Ev bi piranî ji ber taybetmendiyên fîlojenetîk ên taybetmendiyên metabolîk ên berawirdî li seranserê rêzikên nebatan ên dûr-dirêj e. Kêmbûn dikare were bikar anîn da ku rêbazên analîza hedefê girêbide. Herikîna xebatê ya MS/MS ya heyî ku ji hêla teoriya agahdariyê ve hatî pêvajoy kirin, dişibihiya avahiya MS/MS ya metabolîtên nenas (bêyî hilbijartina metabolîtên berê) hejmar dike û van MS/MS vediguherîne komek MS/MS, bi vî rengî di metabolîzma profesyonel de Ev modelên makro-pêşveçûnê di pîvana dabeşkirinê de têne berhev kirin. Nîşaneyên îstatîstîkî yên hêsan. Pêvajo dişibihe analîza fîlojenetîk, ku dikare hevrêziya rêzê bikar bîne da ku rêjeya cihêrengiyê an pêşkeftina karakterê bêyî pêşbîniya berê hejmar bike.
Di asta biyokîmyayî de, hîpoteza pişkinînê ya Firn û Jones (53) nîşan dide ku cihêrengiya metabolîk di astên cûda de tê parastin da ku madeyên xav peyda bike da ku çalakiyên biyolojîkî yên metabolîtên ku berê ne têkildar an jî cîgir in, pêk bîne. Rêbazên teoriya agahdariyê çarçoveyek peyda dikin ku tê de ev veguherînên evolusyonî yên taybetî yên metabolîtan ku di dema pisporbûna metabolîtan de çêdibin dikarin wekî beşek ji pêvajoya pişkinîna evolusyonî ya pêşniyarkirî werin hejmartin: adaptasyona biyolojîkî ya çalak ji taybetmendiya nizm berbi taybetmendiya bilind Metabolîtên astengkirî yên hawîrdorek diyarkirî.
Bi tevayî, di rojên destpêkê yên biyolojiya molekulî de, teoriyên girîng ên parastina nebatan hatin pêşxistin, û rêbazên ku ji hêla hîpotezên deduktîf ve têne rêvebirin bi berfirehî wekî yekane rêya pêşkeftina zanistî têne hesibandin. Ev bi piranî ji ber sînorkirinên teknîkî yên pîvandina tevahiya metabolomê ye. Her çend rêbazên ku ji hêla hîpotezên ve têne rêvebirin bi taybetî di hilbijartina mekanîzmayên din ên sedemî de bikêr in jî, şiyana wan a pêşvebirina têgihîştina me ya torên biyokîmyayî ji rêbazên hesabkerî yên ku niha di zanista daneyên hevdem de hene sînordartir e. Ji ber vê yekê, teoriyên ku nayên pêşbînîkirin ji çarçoveya daneyên berdest pir wêdetir in, ji ber vê yekê formula hîpotezîkî/çerxa ceribandinê ya pêşveçûnê di warê lêkolînê de nayê betalkirin (4). Em pêşbînî dikin ku herikîna hesabkerî ya metabolomîkê ya ku li vir hatî destnîşan kirin dikare eleqeya li ser pirsgirêkên (çawa) û (çima) yên dawî yên cihêrengiya metabolîk ji nû ve vejîne, û beşdarî serdemek nû ya zanista daneyên bi rêberiya teorîk bibe. Serdemê teoriyên girîng ên ku îlhama nifşên berê dane ji nû ve lêkolîn kir.
Xwarina rasterast a gihaxwaran bi rêya xwedîkirina larvayek duyemîn a qonaxa piştî mirinê an larvaya Sl li ser pelê nebatek gulvedanê ya reng-zer, bi 10 dubarekirinên nebatan li ser her nebatek, tê kirin. Larvayên kêzikan bi kelepan hatin girtin, û şaneyên pelê yên mayî 24 û 72 demjimêran piştî enfeksiyonê hatin berhevkirin û zû hatin cemidandin, û metabolîtan hatin derxistin.
Dermankirina gihaxwaran bi awayekî pir hevrêzkirî simul bikin. Rêbaz ew e ku di qonaxa mezinbûna garlanda qumaşê de, sê rêzên tirî li her du aliyên navenda sê pelên nebatan ên bi tevahî vekirî werin qulkirin, û di cih de 1:5 Diluted Ms were danîn. An jî bi tiliyên lepikan S1 OS têxin birîna qulkirinê. Pelekê wekî ku li jor hatî vegotin berhev bikin û pêvajo bikin. Rêbaza ku berê hatî vegotin bikar bînin da ku metabolîtên seretayî û hormonên nebatan derxînin (54).
Ji bo sepanên JA yên eksojen, sê pelên pelê yên her yek ji şeş nebatan gulvedan ên her cureyî bi 20μl pasta lanolînê ku 150μg MeJA (Lan + MeJA) tê de heye, û 20μl lanolînê û dermankirina birînê (Lan + W) têne dermankirin, an jî 20μl lanolîna saf wekî kontrol tê bikar anîn. Pel 72 demjimêran piştî dermankirinê hatin berhevkirin, di nîtrojena şil de hatin cemidandin û heta bikaranînê di -80°C de hatin hilanîn.
Di koma lêkolîna me de çar xetên transgenîk ên JA û ET, bi taybetî irAOC (36), irCOI1 (55), irACO û sETR1 (48), hatine destnîşankirin. irAOC bi tundî kêmbûnek di asta JA û JA-Ile de nîşan da, lê irCOI1 ji JAyan re hesas nebû. Li gorî EV, kombûna JA-Ile zêde bû. Bi heman awayî, irACO dê hilberîna ET kêm bike, û li gorî EV, sETR1, ku ji ET re bêhesas e, dê hilberîna ET zêde bike.
Spektrometreyeke lazer a fotoakustîk (sensora ET ya demrast a Sensor Sense ETD-300) ji bo pîvandina ET bi awayekî bêserûber tê bikaranîn. Di cih de piştî dermankirinê, nîvê pelan hatin birîn û hatin veguheztin nav şûşeyek cam a 4 ml ya mohrkirî, û di nav 5 saetan de destûr hat dayîn ku qada serî kom bibe. Di dema pîvandinê de, her şûşeyek bi herikîna 2 lître/saet hewaya paqij ji bo 8 hûrdeman hate şuştin, ku berê ji katalîzatorek ku ji hêla Sensor Sense ve hatî peyda kirin re derbas bûbû da ku CO2 û avê were rakirin.
Daneyên mîkroarrayê di destpêkê de di (35) de hatine weşandin û di Databasa Berfireh a Derbirîna Genan a Navenda Neteweyî ya Agahdariya Biyoteknolojiyê (NCBI) de hatine hilanîn (hejmara gihîştinê GSE30287). Daneyên ku bi pelên ku ji ber dermankirina W + OSM-an çêbûne û kontrola nezirardar re têkildar in, ji bo vê lêkolînê hatine derxistin. Şîddeta xav log2 e. Berî analîza îstatîstîkî, xeta bingehîn bi karanîna pakêta nermalava R hate veguheztin û normalîzekirin bo rêjeya sedî 75-an.
Daneyên rêzkirina RNA-yê yên orîjînal (RNA-seq) ên cureyên Nicotiana ji Arşîvên Xwendina Kurt a NCBI (SRA) hatin wergirtin, hejmara projeyê PRJNA301787 e, ku ji hêla Zhou et al. (39) ve hatî ragihandin û wekî ku di (56) de hatî vegotin berdewam bikin. Daneyên xav ên ku ji hêla W + W, W + OSM û W + OSS1 ve hatine pêvajokirin ku bi cureyên Nicotiana re têkildar in, di vê lêkolînê de ji bo analîzê hatin hilbijartin, û bi vî rengî hatin pêvajokirin: Pêşîn, xwendinên RNA-seq ên xav hatin veguheztin formata FASTQ. HISAT2 FASTQ vediguherîne SAM, û SAMtools pelên SAM vediguherîne pelên BAM yên rêzkirî. StringTie ji bo hesabkirina îfadeya genê tê bikar anîn, û rêbaza wê ya îfadeyê ew e ku perçe li ser hezar perçeyên bingehîn li ser mîlyon perçeyên transkrîpsiyonê yên rêzkirî hene.
Stûna kromatografiya Acclaim (150 mm x 2.1 mm; mezinahiya perçeyan 2.2μm) ku di analîzê de tê bikar anîn û stûna parastinê ya 4 mm x 4 mm ji heman materyalê pêk tên. Gradienta dualî ya jêrîn di pergala Dionex UltiMate 3000 Ultra High Performance Liquid Chromatography (UHPLC) de tê bikar anîn: 0 heta 0.5 deqîqe, îzokratîk 90% A [ava deîyonîzekirî, 0.1% (v/v) asetonîtrîl û 0.05% asîda formîk], 10% B (Asetonîtrîl û 0.05% asîda formîk); 0.5 heta 23.5 deqîqe, qonaxa gradient bi rêzê ve 10% A û 90% B ye; 23.5 heta 25 deqîqe, îzokratîk 10% A û 90% B. Rêjeya herikînê 400μl/min e. Ji bo hemî analîzên MS, eluenta stûnê têxin nav analîzkerek çarqoşeyî û dema firînê (qTOF) ku bi çavkaniyek elektrospray ve hatî çêkirin ku di moda îyonîzasyona erênî de dixebite (voltaja kapîlar, 4500 V; dergeha kapîlar 130 V; Germahiya zuwakirinê 200°C; herikîna hewayê ya zuwakirinê 10 lître/deqîqe).
Analîza perçeyên MS / MS (ku ji vir û pê ve wekî MS / MS tê binavkirin) pêk bînin ku ne girîng e an jî ji daneyan nayê cudakirin da ku agahdariya avahîsaziyê ya li ser profîla metabolîk a giştî ya tespîtkirî bistînin. Têgeha rêbaza MS/MS ya bêserûber li ser vê rastiyê ye ku çarçik pencereyek îzolekirina girseyê ya pir mezin heye [ji ber vê yekê, hemî sînyalên rêjeya giranî-barkirinê (m/z) wekî perçeyan bihesibînin]. Ji ber vê sedemê, ji ber ku amûra Impact II nekaribû tilteke CE biafirîne, çend analîzên serbixwe bi karanîna nirxên enerjiya pevçûnê ya ji ber pevçûnê (CE) ya zêdebûyî hatin kirin. Bi kurtasî, pêşî nimûneyê bi îyonîzasyona UHPLC-elektrospray/qTOF-MS bi karanîna moda spektrometriya girseyê ya yekane (şert û mercên parçebûna kêm ên ku ji ber parçebûna di çavkaniyê de têne çêkirin) analîz bikin, ji m/z 50 heta 1500 bi frekanseke dubarekirinê ya 5 Hz bişopînin. Ji bo analîza MS/MS nîtrojenê wekî gaza pevçûnê bikar bînin, û pîvandinên serbixwe li çar voltaja veqetandinê ya ji ber pevçûnê ya cûda yên jêrîn pêk bînin: 20, 30, 40, û 50 eV. Di tevahiya pêvajoya pîvandinê de, çarçik xwediyê pencereya îzolekirina girseyê ya herî mezin e, ji m/z 50 heta 1500. Dema ku ceribandina m/z ya laşê pêş û firehiya îzolekirinê li ser 200 were danîn, rêza girseyê ji hêla nermalava xebitandinê ya amûrê û 0 Da ve bixweber tê çalak kirin. Ji bo perçeyên girseyê wekî di moda girseya yekane de sken bikin. Ji bo kalibrîbrasyona girseyê sodyûm format (50 ml îzopropanol, 200 μl asîda formîk û 1 ml çareseriya avî ya 1M NaOH) bikar bînin. Bi karanîna algorîtmaya kalibrîbrasyona rastbûna bilind a Bruker, pelê daneyê piştî xebitandina spektruma navînî di heyamek diyarkirî de tê kalibrîbr kirin. Fonksiyona hinardekirinê ya nermalava Data Analysis v4.0 (Brook Dalton, Bremen, Almanya) bikar bînin da ku pelên daneyên xav veguherînin formata NetCDF. Koma daneyên MS/MS di databasa metabolomîk a vekirî MetaboLights (www.ebi.ac.uk) de bi hejmara gihîştinê. MTBLS1471 hatiye tomar kirin.
Komkirina MS/MS dikare bi rêya analîza korelasyonê ya di navbera sînyalên kalîteya MS1 û MS/MS de ji bo enerjiya pevçûnê ya kêm û bilind û qaîdeyên nû hatine bicîhkirin were pêkanîn. Skrîpta R ji bo pêkanîna analîza korelasyonê ya belavkirina pêşengê hilberê tê bikar anîn, û skrîpta C# (https://github.com/MPI-DL/indiscriminant-MS-MS-assembly-pipeline) ji bo bicîhkirina qaîdeyan tê bikar anîn.
Ji bo kêmkirina xeletiyên erênî yên derewîn ên ji ber dengê paşxaneyê û têkiliya derewîn a ji ber tespîtkirina hin taybetmendiyên m/z di çend nimûneyan de, em fonksiyona "lûtkeya tijî" ya pakêta R bikar tînin. XCMS (ji bo rastkirina dengê paşxaneyê) divê were bikar anîn da ku şîdeta "NA" (lûtkeya nehatî tespîtkirin) biguhezîne. Dema ku fonksiyona lûtkeya tijî tê bikar anîn, hîn jî gelek nirxên şîdeta "0" di koma daneyan de hene ku dê bandorê li hesabkirina têkiliyê bikin. Dûv re, em encamên pêvajoya daneyan ên ku dema ku fonksiyona lûtkeya tijî tê bikar anîn û dema ku fonksiyona lûtkeya tijî nayê bikar anîn têne bidestxistin, didin ber hev, û nirxa dengê paşxaneyê li gorî nirxa texmînkirî ya navînî ya rastkirî hesab dikin, û dûv re van nirxên şîdeta 0 bi nirxa paşxaneyê ya hesabkirî diguhezînin. Me her weha tenê taybetmendiyên ku şîdeta wan sê qat ji nirxa paşxaneyê derbas bûye li ber çavan girtin û wan wekî "lûtkeyên rastîn" bihesibandin. Ji bo hesabên PCC, tenê sînyalên m/z yên pêşgotina nimûneyê (MS1) û komên daneyên perçeyan ên bi herî kêm heşt lûtkeyên rastîn têne hesibandin.
Eger şîddeta taybetmendiya kalîteya pêşmerc di tevahiya nimûneyê de bi şîddeta kêmkirî ya heman taybetmendiya kalîteyê ya ku rastî enerjiya pevçûnê ya kêm an bilind tê ve bi girîngî ve girêdayî be, û taybetmendî ji hêla CAMERA ve wekî lûtkeya îzotopê neyê nîşankirin, ew dikare bêtir were pênase kirin. Dûv re, bi hesabkirina hemî cotên gengaz ên pêşmerc-berhem di nav 3 saniyan de (pencereya dema ragirtinê ya texmînkirî ji bo ragirtina lûtkeyê), analîza korelasyonê tê kirin. Tenê dema ku nirxa m/z ji nirxa pêşmerc kêmtir be û perçebûna MS/MS di heman cîhê nimûneyê de di koma daneyan de wekî pêşmerc ku jê tê wergirtin çêbibe, ew wekî perçeyek tê hesibandin.
Li ser bingeha van du qaîdeyên hêsan, em perçeyên diyarkirî yên bi nirxên m/z yên ji m/z yên pêşberê diyarkirî mezintir derdixin, û li ser bingeha pozîsyona nimûneyê ku pêşber xuya dike û perçeya diyarkirî. Her weha gengaz e ku taybetmendiyên kalîteyê yên ku ji hêla gelek perçeyên di çavkaniyê de têne çêkirin ku di moda MS1 ​​de wekî pêşberên namzed têne çêkirin werin hilbijartin, bi vî rengî pêkhateyên MS/MS yên zêde têne çêkirin. Ji bo kêmkirina vê dubarebûna daneyan, heke dişibihiya NDP ya spektran ji 0.6 derbas bibe, û ew aîdî kromatograma "pcgroup" a ku ji hêla CAMERA ve hatî şîrove kirin in, em ê wan bikin yek. Di dawiyê de, em her çar encamên CE yên bi pêşber û perçeyan ve girêdayî di nav spektruma tevlihev a dawîn a dekonvolatîf de bi hilbijartina lûtkeya herî bilind a şiddetê di nav hemî lûtkeyên namzed de bi heman nirxa m/z di enerjiyên pevçûnê yên cûda de dikin yek. Gavên pêvajoyê yên paşîn li ser têgeha spektruma tevlihev in û şert û mercên CE yên cûda yên ku ji bo zêdekirina îhtîmala perçebûnê hewce ne li ber çavan digirin, ji ber ku hin perçe tenê dikarin di bin enerjiyek pevçûnê ya taybetî de werin tespît kirin.
RDPI (30) ji bo hesabkirina teşwîqkirina profîla metabolîk hate bikar anîn. Cûrbecûrîya spektruma metabolîk (îndeksa Hj) ji pirbûna pêşmadeyên MS/MS bi karanîna entropiya Shannon a belavkirina frekansa MS/MS bi karanîna hevkêşeya jêrîn a ku ji hêla Martínez et al. (8) ve hatî vegotin tê wergirtin. Hj = −∑i = 1mPijlog2(Pij) ku Pij bi frekansa nisbî ya MS/MS-ya i-emîn di nimûneya j-emîn de re têkildar e (j = 1, 2,…, m) (i = 1, 2, …, m) t).
Taybetmendiya metabolîk (îndeksa Si) wekî nasnameya îfadeya MS/MS-yek diyarkirî di têkiliya bi frekansa di navbera nimûneyên ku têne nirxandin de tê pênasekirin. Taybetmendiya MS/MS wekî Si = 1t (∑j = 1tPijPilog2PijPi) tê hesibandin.
Ji bo pîvandina îndeksa δj ya taybetî ya metabolomeyê ya her nimûneya j, û navînîya taybetmendiya MS/MS, formula jêrîn bikar bînin: δj = ∑i = 1mPijSi
Spektrumên MS/MS bi cotan têne rêzkirin, û wekhevî li gorî her du xalan tê hesibandin. Pêşî, bi karanîna NDP-ya standard (ku wekî rêbaza koralasyona kosînusê jî tê zanîn), ji bo nirxandina wekheviya beşê di navbera spektruman de hevkêşeya jêrîn bikar bînin NDP = (∑iS1 & S2WS1, iWS2, i) 2∑iWS1, i2∑iWS2, i2 ku S1 û S2 bi hev re, ji bo spektruma 1 û spektruma 2, û her weha WS1, i û WS2, i giraniya li gorî şiddeta lûtkeyê temsîl dike ku cûdahiya lûtkeya hevpar a i-emîn di navbera her du spektruman de ji 0.01 Da kêmtir e. Giranî wiha tê hesibandin: W = [şiddeya lûtkeyê] m [kalîte] n, m = 0.5, n = 2, wekî ku ji hêla MassBank ve hatî pêşniyar kirin.
Rêbazek duyemîn a skorê hate bicîhkirin, ku tê de analîzkirina NL-ya hevpar a di navbera MS/MS de hebû. Ji bo vê armancê, me 52 navnîşên NL-ê yên ku di pêvajoya parçekirina MS-ê de pir caran têne dîtin, û NL-ya taybetîtir (pelê daneyê S1) ku berê ji bo spektruma MS/MS-ê ya metabolîtên duyemîn ên cureyên Nepenthes-ê yên qelsbûyî hatiye şîrovekirin, bi kar anîn (9, 26). Ji bo her MS/MS-ê vektorek dualî ya 1 û 0 biafirînin, ku bi rêzê ve li gorî niha û tunebûna hin NL-an e. Li gorî dişibiya dûrbûna Euclidean, puana dişibiya NL-ê ji bo her cotek vektorên NL-ê yên dualî tê hesibandin.
Ji bo pêkanîna komkirina dualî, me pakêta R ya DiffCoEx bikar anî, ku li ser bingeha berfirehkirina Analîza Hev-derbirîna Gene ya Weighted (WGCNA) ye. Bi karanîna matrîsên skora NDP û NL yên spektrumên MS/MS, me DiffCoEx bikar anî da ku matrîsa koralasyona berawirdî hesab bikin. Komkirina dualî bi danîna parametreya "cutreeDynamic" li ser method = "hybrid", cutHeight = 0.9999, deepSplit = T, û minClusterSize = 10 tê kirin. Koda çavkaniya R ya DiffCoEx ji pelê zêde 1 ji hêla Tesson et al. (57) ve hate dakêşandin; Pakêta nermalava R ya WGCNA ya pêwîst dikare li https://horvath.genetics.ucla.edu/html/CoexpressionNetwork/Rpackages/WGCNA were dîtin.
Ji bo pêkanîna analîza tora molekulî ya MS/MS, me girêdana spektral a cotkirî li ser bingeha celebên dişibiniya NDP û NL hesab kir, û nermalava Cytoscape bikar anî da ku topolojiya torê bi karanîna sêwirana organîk di sepana dirêjkirina algorîtmaya sêwirana CyFilescape yFiles de dîtbarî bike.
Ji bo analîzkirina statîstîkî li ser daneyan, guhertoya R 3.0.1 bikar bînin. Girîngiya statîstîkî bi karanîna analîza du-alî ya guherbariyê (ANOVA) hate nirxandin, û dû re jî ceribandina post-hoc a cudahiya girîng a Tukey (HSD). Ji bo analîzkirina cudahiya di navbera dermankirina gihaxwar û kontrolê de, belavkirina du-alî ya her du komên nimûneyan bi heman guherbariyê bi karanîna testa t ya Student hate analîzkirin.
Ji bo materyalên pêvek ên vê gotarê, ji kerema xwe li http://advances.sciencemag.org/cgi/content/full/6/24/eaaz0381/DC1 binêrin.
Ev gotareke gihîştina vekirî ye ku li gorî şertên Lîsansa Creative Commons Attribution-Non-Commercial tê belavkirin, ku destûrê dide karanîn, belavkirin û hilberandinê di her medyayê de, heya ku karanîna dawîn ne ji bo berjewendiya bazirganî be û pêşgotin ew be ku xebata orîjînal rast be. Çavkanî.
Têbînî: Em tenê ji we dixwazin ku hûn navnîşana e-nameya xwe bidin da ku kesê ku hûn pêşniyarî rûpelê dikin bizanibe ku hûn dixwazin ew e-nameyê bibînin û ew ne spam e. Em ê tu navnîşanên e-nameyan negirin.
Ev pirs ji bo ceribandina ka hûn mêvan in û pêşîgirtina şandina otomatîkî ya spamê tê bikar anîn.
Teoriya agahdariyê ji bo berawirdkirina metabolomên taybet û pêşbînîkirina teoriyên parastina testê pereyek gerdûnî peyda dike.
Teoriya agahdariyê ji bo berawirdkirina metabolomên taybet û pêşbînîkirina teoriyên parastina testê pereyek gerdûnî peyda dike.
©2021 Komeleya Amerîkî ji bo Pêşveçûna Zanistê. hemû maf parastî ne. AAAS hevparê HINARI, AGORA, OARE, CHORUS, CLOCKSS, CrossRef û COUNTER e. ScienceAdvances ISSN 2375-2548.